СУБТИЛИЗИН КАРЛСБЕРГ В КОМПЛЕКСЕ С SDS – ЭФФЕКТИВНЫЙ КАТАЛИЗАТОР ДЛЯ ТВЕРДОФАЗНОЙ СЕГМЕНТНОЙ КОНДЕНСАЦИИ ПЕПТИДОВ НА КРИОГЕЛЕ ПОЛИВИНИЛОВОГО СПИРТА

© 2008 г. О. М. Аникина*, Е. Н. Лысогорская**, Е. С. Оксенойт**, В. И. Лозинский***, И. Ю. Филиппова**^#

^#Тел.: (495) 939-55-29; факс: (495) 932-88-46; e-mail: irfilipp@genebee.msu.su

*Факультет биоинженерии и биоинформатики, Московский государственный университет им. М. В. Ломоносова, Москва;
**Химический факультет, Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, 119991, В-234, Москва, Воробьевы горы;
***Институт элементоорганических соединений им. А.Н. Несмеянова РАН, Москва

Поступила в редакцию 10.07.2007 г. Принята к печати 07.11.2007 г.

Показана способность субтилизина Карлсберг (SC) в составе комплекса с додецилсульфатом натрия (SDS-SС) катализировать реакцию твердофазной сегментной конденсации пептидов в органической среде на аминосилохроме и криогеле поливинилового спирта (ПВС), активированном глутаровым альдегидом или дивинилсульфоном. В случае криогеля ПВС в качестве вставки между носителем и пептидом использованы диамины различной длины общей формулы NH₂-(CH₂)_n-NH₂ (n = 2, 4, 6). Модельную реакцию ферментативного присоединения трипептида Dnp-Ala-Ala-Leu-OMe к криогелю ПВС под действием комплекса SDS-SC проводили в смеси абс. этанола и DMSO (7 : 3 по объему), используя 10-кратный избыток карбоксильного компонента. Молярное соотношение фермент–субстрат составляло 1 : 88. Изучено влияние способа активации матрицы, длины спейсера и времени реакции на ее эффективность. Показано, что на криогеле ПВС, активированном глутаровым альдегидом, наиболее полно с выходом 60% ферментативная конденсация протекала при использовании в качестве вставки гексаметилендиамина. В случае этилендиамина и тетраметилендиамина эффективность реакции была существенно ниже – 10 и 15% соответственно. Наилучший результат был достигнут на криогеле ПВС, активированном дивинилсульфоном, с использованием в качестве спейсера гексаметилендиамина. На этом носителе проведена двухстадийная конденсация трипептидов и показано, что ферментативная конденсация на второй стадии проходила лучше (с выходом 85%), чем на первой (выход – 37%).

Ключевые слова: ферментативный пептидный синтез, SDS-субтилизин Карлсберг, криогель поливинилового спирта, органические растворители.

Биоорг.химия 2008, 34(3): 365-370