РАВНОМЕРНО МЕЧЕННЫЕ ТРИТИЕМ ПЕПТИДЫ В ИССЛЕДОВАНИЯХ ПО ИХ БИОДЕГРАДАЦИИ IN VIVO И IN VITRO

© 2006 г. Ю. А. Золотарев * , А. К. Дадаян * , О. В. Долотов * , В. С. Козик * , Н. В. Кост ** , О. Ю. Соколов ** , Е. М. Дорохова * , В. К. Мешавкин ** , Л. С. Иноземцева * , М. В. Габаева ** , Л. А. Андреева * , Л. Ю. Алфеева * , Т. С. Павлов *** , К. Е. Бадмаева *** , С. Е. Бадмаева *** , З. В. Бакаева *** , Г. Н. Копылова *** , Г. Е. Самонина *** , Б. В. Васьковский **** , И. А. Гривенников * , А. А. Зозуля ** , Н. Ф. Мясоедов *

* Институт молекулярной генетики РАН, 123182, Москва, пл. Курчатова, 2 ;

** Научный центр психического здоровья РАМН, Москва;

*** Институт биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва;

**** Биологический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва

Поступила в редакцию 04.07.2005 г. Принята к печати 05.07.2005 г.

Работа посвящена применению равномерно меченных тритием пептидов для изучения их биодеградации in vivo и in vitro. Реакцией высокотемпературного твердофазного каталитического изотопного обмена (ВТКИО) со спилловер-тритием получены равномерно меченные тритием биологически активные пептиды с молярной радиоактивностью 50–150 Ки/ммоль. Распределение изотопной метки по всем аминокислотам в этих пептидах позволяет определять практически все возможные продукты их ферментативного гидролиза одновременно. Разработанный метод анализа включает экстракцию органическими растворителями меченных тритием пептидов из тканей организма и хроматографическое выделение индивидуальных меченых пептидов из смеси продуктов биодеградации. Концентрацию исследуемого пептида и продуктов его биодеградации рассчитывают с использованием жидкостного сцинтилляционного счета. С использованием описанного подхода исследованы пути биодеградации пептидов TKPRPGP (Селанк) и трипептида PGP в плазме крови. Исследована также фармакокинетика пептидного анксиолетика Селанка в тканях мозга при интраназальном введении in vivo. Определены концентрации меченых пептидов и показано, что основными продуктами биодеградации Селанка являются пентапептид TKPRP, трипептид TKP, дипептиды RP и GP. Исследована биодеградация гептапептида MEHFPGP (Семакс) в присутствии нервных клеток и определено, что основными продуктами его биодеградации являются пентапептид HFPGP, трипептид PGP. Исследовано влияние на энкефалиназную активность плазмы крови с использованием равномерно меченного тритием [Leu]энкефалина. Показано, что высокая ингибирующая способность Семакса на энкефалиназы плазмы крови связана с его действием на аминопептидазы. Предложенный метод, основанный на использовании равномерно меченных тритием пептидов, дает возможность как определять концентрацию пептидов в тканях in vitro и in vi v o, так и оценивать активность ферментов, участвующих в их деградации.

Ключевые слова: пептиды, меченные тритием; биодеградация пептидов, энкефалиназы плазмы крови, ингибиторы пептидаз, Селанк, Семакс

Биоорг. химия 2006, 32 (2):183-191